E. D. Mytsa, L.Yu. Kokaeva, S.N. Elansky
Oomiceta fitoftora infestanti (Mont) de Bary causa la peronospora, una pericolosa malattia delle patate e dei pomodori. Una delle principali fonti di inoculo primario P.infestans sono strutture riproduttive a riposo a pareti spesse - oospore.
Le oospore ibride formate a seguito dell'incrocio di ceppi parentali geneticamente diversi contribuiscono ad un aumento della diversità genotipica nella popolazione, a seguito della quale il processo di adattamento dei ceppi a nuove varietà e ai fungicidi applicati viene accelerato.
Formazione di oospore P.infestans sul campo è stato notato in molti paesi del mondo: Russia (Smirnov et al., 1999), Norvegia (Hermansen et al., 2002), Svezia (Strömberg et al., 2001), Paesi Bassi (Kessel et al., 2002) e altri regioni. Le oospore sono in grado di persistere nel terreno in uno stato vitale per più di 2 anni (Bødker et al., 2006) e causare infezioni alle piante dopo lo svernamento (Ulanova et al., 2010; Lehtinen et al., 2002).
In precedenza è stato dimostrato che le foglie di piante di diversi livelli del cespuglio di patate hanno differenze di resistenza alla peronospora; aumenta dalle foglie inferiori a quelle superiori. Questa tendenza non dipende dall'età delle foglie, dall'età della pianta o dalla varietà di patate (Vesper et al., 2003). Allo stesso tempo, non siamo stati in grado di trovare dati sulle differenze nell'intensità della formazione di oospore nelle foglie dei diversi strati del cespuglio di patate in letteratura. Tuttavia, se esistono tali differenze, è necessario tenerne conto quando si prelevano campioni di foglie per l'analisi della formazione di oospore e quando si interpretano i risultati ottenuti da altri autori. Lo scopo di questo lavoro è stato quello di studiare la formazione di oospore nelle foglie staccate di diversi strati di una pianta di patata, poste nelle stesse condizioni in camere umide.
Materiali e metodi
Abbiamo usato 5 isolati P.infestans diversi tipi di accoppiamento isolati da campioni colpiti portati dalle regioni di Mosca, Ryazan e Leningrado. Di questi, 3 paia di ceppi di diversi tipi di accoppiamento sono stati selezionati, dando abbondanti oospore quando testati in terreno di avena agar.
Per i test, abbiamo utilizzato piante di patate prive di virus delle seguenti varietà coltivate in serra (in un substrato di torba): Early Sandrin, Zorachka, Uladar, Osiris, Ilyinsky medio-precoce, Yanka di mezza stagione.
Per l'analisi sono state selezionate foglie semplici di diversi livelli della pianta di patata. Tre foglie sono state selezionate dal livello inferiore (4 foglie composte inferiori), tre dall'alto (3-4 foglie composte in alto) e tre foglie dal centro del cespuglio. Le foglie semplici sono state pesate, fotografate su carta coordinata (per calcolare il volume e l'area), quindi poste a testa in giù sulla superficie di acqua sterile, versate 25 ml in piastre Petri. Quindi ciascuna foglia è stata infettata con una goccia di una sospensione mista di isolati di zoosporangia A1 e A2 del tipo di accoppiamento. Per tre foglie raccolte da ogni livello, è stato utilizzato un inoculo di tre diverse coppie di isolati. Una foglia è stata infettata con una miscela di inoculo di un paio di isolati.
Per preparare una sospensione di zoosporangia, isolati di diversi tipi di accoppiamento sono stati coltivati su terreno di avena agar per 7 giorni, dopodiché gli zoosporangi sono stati lavati via con acqua distillata sterile. La concentrazione di inoculo era di 5-7 zoospore nel campo visivo del microscopio a un ingrandimento di 80x. Ogni foglia è stata infettata con una goccia di una sospensione mista di isolati di zoosporangia tipo di accoppiamento A1 e A2.
In tutti gli esperimenti, sono state utilizzate 3 foglie di patata per variante. Dopo incubazione per 20 giorni a 18 ° C, ciascuna foglia è stata omogeneizzata in un mortaio con 2 ml di acqua distillata. Dalla sospensione risultante sono stati prelevati 3 campioni, dai quali sono stati preparati i preparati per la microscopia.
In ciascuna variante, sono stati esaminati 180 campi visivi, dopodiché il numero di oospore è stato ricalcolato per 1 mm2 superficie del foglio. È stata calcolata la media dei risultati del conteggio per ciascuna variante.
Per calcolare l'intervallo di confidenza (μ) per un livello di significatività di 0,05, è stata utilizzata la seguente formula
dove s è la deviazione standard, n è il numero di misurazioni, t è la costante del test t per un livello di significatività di 0,05. Tutti i calcoli sono stati eseguiti in Excel (pacchetto Microsoft Office).
risultati e discussione
L'inoculo di foglie raccolte da diversi strati del cespuglio di patate e poste nelle stesse condizioni in camere umide ha rivelato differenze nell'intensità della formazione di oospore. In tutte le varietà studiate, il numero massimo di oospore è stato formato dall'inoculo di foglie raccolte dai livelli inferiore e medio della boscaglia. Non sono state riscontrate differenze significative nella formazione di oospore nelle foglie inferiori e medie.
Il numero minimo di oospore si è formato nelle foglie dello strato superiore (Fig.1).
Nelle foglie dei livelli inferiore e medio, il numero massimo di oospore si è formato nelle varietà Sandrin, Ilyinsky, Zorachka, Uladar e Osiride. Si sono formati un po 'meno intensamente nelle foglie della varietà Yanka. Il numero massimo di oospore nelle foglie dello strato superiore è stato osservato nelle foglie della varietà Uladar, quindi Zorachka, Osiris, Yanka, Ilyinsky, Sandrin sono andati in ordine decrescente, ma non tutte le differenze erano statisticamente significative.
Figura: 1. Formazione di oospore nelle foglie di diversi strati del cespuglio di patate. Quelle inferiori sono le foglie dei tre livelli inferiori del cespuglio, quelle superiori sono 3-4 foglie complesse dalla cima della pianta, quelle centrali provengono dal centro del cespuglio.
Le barre di errore mostrano l'intervallo di confidenza per un livello di significatività di 0,05.
Sul campo, le condizioni microclimatiche contribuiscono anche alla formazione di oospore nelle foglie inferiori e medie del cespuglio: maggiore umidità, ridotta insolazione solare e sbalzi di temperatura giornalieri (Harrison, 1992). L'irrorazione dall'alto produce meno pesticidi nella parte inferiore e al centro del cespuglio. Per ridurre la formazione di oospore, è necessario utilizzare tecnologie che consentano di fornire con successo fungicidi nelle parti inferiore e centrale della boscaglia. Buoni risultati possono essere ottenuti utilizzando nebulizzatori d'aria turbolenti e fungicidi sistemici che possono diffondersi nelle parti non trattate della macchia.
Questo lavoro è stato sostenuto dalla Russian Science Foundation (progetto n. 14-50-00029).
L'articolo è stato pubblicato sulla rivista "Potato Protection" (n. 2, 2015)